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豬細(xì)小病毒抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
更新時(shí)間:2025-06-24 點(diǎn)擊量:165

豬細(xì)小病毒抗體檢測(cè)試劑盒 說(shuō)明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:豬細(xì)小病毒抗體診斷試劑盒(酶聯(lián) 免疫法)

英文名稱 :Porcine Parvovirus Antibody Test Kit (ELISA), PPV Ab

【規(guī)格】

96 T×2

【預(yù)期用途】

本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中細(xì)小病 毒 IgG 抗體。用于評(píng)估豬場(chǎng)豬細(xì)小病毒疫苗免 疫狀況以及感染豬的血清學(xué)診斷。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) ( ELISA )原理,由包被有高純度的豬細(xì)小抗原 的微孔反應(yīng)板、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗豬 IgG 及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被 抗原與樣本中的 PPV-IgG 結(jié)合,再與酶標(biāo)抗 豬 IgG 抗體形成“包被抗原+PPV-IgG+酶標(biāo)抗 豬 IgG 抗體"復(fù)合物,加入顯色劑,通過(guò)酶催 化反應(yīng)顯色。顯色深淺與 PPV-IgG 的量成正 比,當(dāng)顯色超過(guò)設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng) 性,表明免疫有效或有自然感染。

【主要成份】

1抗原包被板96 T×2

2酶標(biāo)記物22 ml

3樣本稀釋液50 ml

4陰性對(duì)照血清1.5 ml

5陽(yáng)性對(duì)照血清1.5 ml

6顯色劑12 ml×2

7終止液12 ml

810×濃縮洗滌液50 ml

9蓋板膜2 張

10說(shuō)明書1 份

【自備器材】

1 .酶標(biāo)儀( 450 nm /630 nm 濾光片)

2 .微量移液器(單道 10-100 μl 、0.5-10 μl 、多 道 30-300 μl)

3 .水浴箱或恒溫箱

4 .微量振蕩器

5 .一次性槍頭(10 μl 、200 μl)

6 .去離子水

【樣本要求】

1 .本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清,樣本應(yīng)無(wú)菌采 集,2 ℃-8 ℃貯存應(yīng)不超過(guò)一周, 長(zhǎng)期應(yīng)在- 20℃以下保存。

2 .避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維 蛋白及污染長(zhǎng)菌的血清樣本。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

1 .試劑盒組分回溫平衡:  試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前, 先取出置室溫 30 min。酶標(biāo)板應(yīng)在室溫中平衡至

潮氣干盡后方可拆開(kāi)。

2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將 樣本作 40 倍稀釋(例:將 5 μl 樣本加至 195 μl 樣本稀釋液中)。

3.配制洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液 直接用去離子水稀釋 10 倍(例:將 10 ml 洗滌液加入 90 ml 去離子水中)。若 10 倍濃 縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶,屬正?,F(xiàn)象,放置 37 ℃ 至溶解后即可。

【檢驗(yàn)方法】

1.  加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條,檢測(cè) 時(shí),設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各 2 孔,分別加入不用 稀釋的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清 100 μl 于相應(yīng)孔中 (可不設(shè)空白對(duì)照)。其余為樣本孔,每孔加 100 μl 用樣本稀釋液稀釋好的樣本。

2.  溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置 37 ℃溫 育 30 min。

3.  洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿反應(yīng) 板孔,靜置 10 s ,直接甩出,洗滌 3 次,最 后一次洗滌后吸干板內(nèi)液體。

4.  加酶:每孔加酶標(biāo)記物 100 μl。

5.  溫育:加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板 膜,置 37 ℃溫育 30 min。

6.  洗板:同步驟 3。

7.  顯色:每孔加顯色劑 100 μl ,振蕩混勻, 37℃避光反應(yīng) 10 min。

8.  終止:每孔加終止液 50 μl,振蕩 10 s,充 分混勻,終止后即讀數(shù)。

9.  讀數(shù):以 450 nm/ 630 nm 雙波長(zhǎng)檢測(cè),讀 取各孔吸光度值(OD 值)。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的 OD 值。檢測(cè)結(jié)果 有效的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔的平均 OD 值≥ 0.60,陰性對(duì)照孔的平均 OD 值<0.40;樣品 中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對(duì)水平 的高低由 S/P 值決定,S/P 值計(jì)算時(shí)按以下方

式處理:

—                  —

S/P=( 樣 本 OD450/630  值 -NC x )/(PC x -

—                                            —

NC x ) ,其 中 NC x 表示 陰性對(duì) 照孔平均

OD450/630值(若小于0.05,則按照0.05 計(jì)算),

PC x表示陽(yáng)性對(duì)照孔平均 OD450/630 值;

當(dāng)樣本的 S/P≥0.20 時(shí)判為陽(yáng)性;樣品 S/P 值<0.20 時(shí)判為陰性。

【注意事項(xiàng)】

1.  請(qǐng)?jiān)谑褂迷噭┖兄埃屑?xì)閱讀說(shuō)明書。

2.  請(qǐng)不要使用過(guò)期的試劑盒組分,不要將不 同批次的組分混合使用。

3.  本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待,試驗(yàn) 廢棄物應(yīng)經(jīng) 121 ℃高壓蒸汽滅菌 30 min ,或 用 5.0 g/L 次氯酸鈉等消毒劑處理 30 min 后 廢棄。

4.  未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔 袋并密封 2 ℃-8 ℃保存。未用完的液體試劑 應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中 于 2 ℃-8 ℃避光保存。

5.  應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,并經(jīng)常 校對(duì)其準(zhǔn)確性。

6.  加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢,防止孔口有 游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

7.  終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng) 立即用大量清水沖洗干凈。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

于 2 ℃-8 ℃避光保存,防止冷凍,有 效期 12 個(gè)月。

【生產(chǎn)日期及批號(hào)】

詳見(jiàn)包外包裝盒

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